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如何正確使用戴安液相色譜柱?
  • 發(fā)布日期:2019-08-13      瀏覽次數(shù):1824
    •   如何正確使用戴安液相色譜柱?
        戴安液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
        1、樣品的前處理
        a、使用流動相溶解樣品。
        b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
        c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
        2、流動相的配制
        液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
        a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
        b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應。
        c、流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
        d、戴安液相色譜柱流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
        e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。
        f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
        3、流動相流速的選擇
        因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
        當選用*流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
        注意:
        a.含水流動相在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入NaN3 ,防止細菌生長。
        b.流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
        c.戴安液相色譜柱使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
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