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1. 目的
規范無菌操作流程，減少及避免發生染菌現象出現。
2. 使用范圍
無菌室及潔凈區的操作。
3. 無菌操作技術原則
3.1 環境要清潔，在每次無菌操作結束后都需要對環境進行清理、清洗；且避免操作前進行
清掃。
3.2 做好個人衛生，進入無菌室前需修剪指甲、洗手，穿好無菌服，帽子需遮住所有頭發，
口罩遮住口鼻。
3.3 在無菌操作時，不可講話，打噴嚏，對懷疑染菌的無菌物品，不可使用。
4. 內容
4.1.1準備：工作人員著裝整潔，洗手、戴口罩、修剪指甲；備齊用物（如：接種針、接種環、酒精燈、斜面、平皿、搖瓶、75%酒精棉、無菌水等）；核對無菌用品，接種菌種的種類、型號。
4.1.2 所有實驗使用的物品都需要進行消毒、滅殺；進入潔凈區前需要經傳遞窗進行紫外表面消毒30min以上；
4.1.3 開始實驗前需要打開超凈臺的紫外燈，消毒半個小時以上；超凈臺避免放入過多的物品（一般只放入當次的實驗所有的物品），所使用的試劑和耗材都需事先進行滅菌（滅菌日期超過4天的需重新消毒）。
4.1.4 進入潔凈區前關閉紫外燈，并打開風機，等待半個小時以上，使臭氧盡量排放干凈。 4.1.5 除去手腕等部位的飾品，穿好無菌服，戴好頭套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏頭發，不暴漏口鼻，不暴漏軀干皮膚和衣物。 4.1.6雙手要進行清洗、消毒。
4.1.7要經風淋室風淋30秒后再進入潔凈室。 4.1.8在局部百級區域操作要戴一次性無菌手套。 4.1.9 實驗操作過程中應盡量減少進入潔凈區的人員（不超過4人/間）并盡量減少人員走動。 4.1.10 所有要放入超凈工作臺的物品都需進過消毒液噴灑擦拭消毒。
4.1.11無菌物品若取離超凈臺則視為已污染，不得放回再用；無菌液體在取離超凈臺前必須密封其開口；密封的無菌液體容器在放入超凈臺后，對其開口前須對開口在酒精燈火焰上燒烤。
4.1.12在拆開任何一次性無菌使用耗材的包裝時都要在超凈臺內完成，并須同時保證與細菌直接接觸的使用端/面不得與超凈臺內的任何物品發生觸碰。 4.1.13工作臺面上的用品要放置有序、布局合理，一般說酒精燈（當工作不需要時也可不用）在中間，右手使用的物品在右側，左手使用的物品在左側。工作時忌忙亂而要有序。 4.1.14 開始操作前先用醫用酒精對雙手進行消毒。 4.1.15點燃潔凈工作臺內的酒精燈，在打開/關閉試劑瓶口、試管口時應將瓶口或者試管口過火；接種針、接種環在使用前或在與臺面發生碰觸后應經過火焰的灼燒；接種針/接種環過火操作方法為：使其頭部到身部反正面在火焰上各烤燎通紅；燒過的器械要冷卻后才能使用，以免對細菌造成損傷。
4.1.16操作前試管（或搖瓶）口需要在火焰上方反轉鐐銬兩周。 4.1.17操作時左手拿試管（或搖瓶），右手拇指、食指、中指操作接種針（接種環），右手小指和無名指夾住瓶塞，取下瓶塞，瓶塞再反轉鐐銬兩周后開始操作。 4.1.18在超凈臺內，盡量避免瓶口長時間敞開直立。
4.1.19蓋封瓶口時，應將瓶口和瓶蓋內面各自在火焰上燎烤兩周再蓋上瓶蓋。
4.1.20實驗用膠塞、橡皮乳頭等橡膠和塑料用品在過火焰時也不能時間過長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養的細胞。 4.2 無菌液體標準轉移程序：
4.2.1無菌液體的轉移須在超凈臺進行，轉移過程要盡量保持密閉，必須用移液管或移液器來完成操作；
4.2.2 移液管上方口應塞入棉絮（脫脂棉），用牛皮紙包好進行消毒滅殺；
4.2.3無菌液體瓶再封口時，須將瓶口和瓶蓋分別燎烤2周后再封蓋；封蓋后須貼上相應的標簽；
4.2.4在使用移液管轉移液體時，應保證移液管距移液器邊緣1cm以上；在使用移液管時，每次液體吸入量不應超過移液管的警示標記，更不能觸及移液管上方的防塵棉絮；在使用移液管移出廢液時，移液管應距廢液缸5cm以上；在將細胞懸液轉移至培養瓶中時，移液管應距培養瓶0.5cm以上；
4.2.5放置吸管時管口應向下傾斜，以防液體倒流入橡皮乳頭內而引起污染或者損壞電動移液槍；
4.2.6向離心管、細胞凍存管、培養瓶、培養皿內添加液態物質時，所加入的量不應超過管上所標示的zui大量；
4.2.7實驗人員在操作時，應保證開口離心管或開口試劑的上方為不可逾越區；嚴格禁止采用雙臂交叉的方式來拿取尚在開口狀態的離心管或試劑瓶；在面向操作臺工作時勿大聲講話或咳嗽，以免噴出的唾沫把細菌帶入工作臺面發生污染；
4.2.8在使用細胞刮刀時，手握部位應盡量遠離培養瓶口，以防污染；
4.2.9如果在轉移任何液態物質的過程中出現滴漏，則應立即使用消毒液浸泡的棉球或紗布擦凈；
4.2.10使用完畢的實驗耗材應在*時間內處理完畢，避免堆積在超凈臺內或層流罩上，以防污染；
4.2.11當所有操作完成后，應及時使用消毒液對臺面進行清理；擦拭完畢后再開啟紫外燈照射一個小時。
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